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血清脂蛋白电泳原理和操作方法

来源:徐州新闻网   时间: 2019-10-09

血清脂蛋白,当前在临床应用方面,它的作用还是比较大的,所以对于很多的患者,就想全面了解一下血清脂蛋白电泳原理和操作方法,为了你能尽快的了解,下面内容就做了详细的介绍,你可以充分的了解一下,相信会对自己以后有帮助.

原理

脂蛋白是在碱性pH条件下,以琼脂糖凝胶或醋酸纤维条带作为载体,从阳性方向来进行分离的。形成的蛋白区带可以用脂肪染料如苏丹黑或者油红染色,它们只用于脂蛋白染色。在琼脂中可能会有附加的聚阴离子和二价阳离子沉淀。脂蛋白沉淀带用光密度计可立即定量分析。脂蛋白区带也可以被切开后重新溶解,对各区带进行胆固醇浓度的直接酶法检测。另外,有报道在用薄层琼脂糖凝胶上进行电泳分离后,可直接检测各脂蛋白组分中的胆固醇含癫痫病发作的护理措施量的方法。

操作方法

(1)将缓冲液加入电泳槽内,调节两侧槽内的缓冲液,使其处于同一平面。

(2)醋酸纤维素薄膜的准备:取醋酸纤维素薄膜(2cm×8cm)在毛面的一端(负极侧)1.5cm处用铅笔轻划一横线,做点样标记。编号,并标明正、负极后,将薄膜置于巴比妥-巴比妥钠缓冲液中浸泡,待充分浸透后(一般为20min)取出,夹于洁净滤纸中间吸去多余的缓冲液。

(3)将醋酸纤维素薄膜毛面向上贴于电泳槽支架上拉直。用微量吸管吸取无溶血血清3~5μl于横线处沿横线加样,样品应与薄膜的边缘保持一定的距离,以免电泳图谱中的蛋白区带变形,待血清渗入薄膜后,反转薄膜,使光面朝上,平直地贴于电泳槽支癫痫病突发症状如何急救架上,用双层滤纸或四层纱布将薄膜的两端与缓冲液连通,稍待片刻。

(4)接通电源,注意醋酸纤维素薄膜上的正、负极,切勿接错。电压90~150V,电流0.4~0.6mA/cm(不同的电泳仪所需电压,电流可能不同,应灵活掌握),夏季通电45min,冬季通电时间稍长,约为60min,电泳区带展开约25~35mm即可。

(5)染色:通电完毕,取下薄膜直接浸于丽春红S染液或氨基黑10B染色液中,染色5~10min(以白蛋白区带染透为止),然后在漂洗液中漂去剩余染料,直至背景无色为止。

(6)定量:

①比色法:将漂洗的薄膜吸干,剪下各染色的蛋白区带入相应的试管中,在白蛋白管中加0.4mol/衡水专业羊羔疯医院L氢氧化钠6ml(计算时吸光度乘以2),其余各管加3ml,振摇数次,置37℃水箱20min使其色泽浸出。氨基黑10B染色用分光光度计在620nm处读取各管吸光度,然后计算出各管的含量(同时做空白管对照)。

丽春红S染色时浸出液用0.1mol/L氢氧化钠,加入量同上法。10min后,白蛋白管内加400ml/L醋酸0.6ml(计算吸光度时乘以2),其余各管加0.3ml,以中和部分氢氧化钠,使色泽加深,必要时离心,取上清液用分光光度计在520nm处读取各管的吸光度(同时作空白对照),然后计算各自的含量。

②光密度计扫描法:A.透明:吸去薄膜上的漂洗液(为防止透明液被稀释影响透明结果),将薄膜浸入透明液中2~3min,然后取服用癫痫平已五年,想停药,可以吗?出,以滚动的方式平贴于洁净无划痕的载物玻璃片上(切勿产生气泡),将此玻片竖立片刻,除去多余透明液后,置于恒温90~100℃的烘箱内,烘烤10~15min,取出冷却至室温,用此法透明的各蛋白区带鲜明,薄膜平整,可供直接扫描和永久保存(用氢萘或液体石蜡透明,应将漂洗过的薄膜烘干后进行透明,此法透明的薄膜不能存久,且易发生皱折)。②扫描定量:将已透明的薄膜放入全自动光密度计或其他光密度计暗箱内,进行扫描分析。

血清脂蛋白电泳原理和操作方法,本篇的内容就为很多的患者,做了详细的介绍,所以要想全面的了解,可以通过以上的介绍,具体的了解一下它的原理,以及操作的方法,相信通过了解,就能具体对原理和操作方法有一个充分的认识。

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